蛋白质:蛋白质相互作用(PPIs) 对细胞中的几乎所有过程都是必不可少的,因此理解PPIs对于理解正常和疾病状态下的细胞生物学就显得至关重要。目前有许多方法用来描述蛋白质相互作用,使用细胞提取物或活细胞来表达潜在的目标蛋白。然而这些研究蛋白质间相互作用的传统方法如Pull-down 或免疫共沉淀,并不能直接提供细胞环境中的数据。
NanoBiT® 技术是一种基于Promega 最新专利萤光素酶NanoLuc® Luciferase 的二亚单元系统,可以定量检测活细胞中蛋白质之间的相互作用。
NanoBiT®与Split技术相比的优势
● 商品化解决方案:NanoBiT®技术是商品化的经优化的完整解决方案,无需自行对萤光素酶进行裁剪构建。
● 更少的位阻:NanoBiT®蛋白更小,更少的位阻现象。LgBiT 是结构稳定的融合伴侣。
● 更强的光信号:NanoBiT® 室温下比应用萤火虫萤光素酶的Split Fluc技术亮100倍,37℃下亮1000倍。
● 数据误差更小:NanoBiT® 技术CVs更低。
GPCR相互作用
β- 抑制蛋白 -2(ARRB2)与 A 类 β2-肾上腺素受体 2(ADRB2)和 B 类精氨酸加压素受体 2(AVPR2)的相互作用。分别用激动剂异丙肾上腺素(10µM ISO) 和肽激素精氨酸加压素(100 nM AVP) ) 诱导相互作用。如预期,A 类受体的再循环速度更快且与 β-抑制蛋白-2 发生瞬时缔合,而 B 类受体的再循环速度则较慢且与 β-抑制蛋白-2之间的缔合作用则较为稳定。
来源于promega官网