流式细胞术(Flow Cytometer,简称FCM)是一种利用流式细胞仪对处于快速直线流动状态中的单个微粒(通常是细胞)进行逐个快速、准确、客观的定性、定量分析,并且同时检测微粒的多项特性,同时可以对特定群体加以分选的技术。
三要素
流式细胞术的三要素分别是流式细胞仪、单微粒样本、荧光染料或者荧光素偶联抗体。
常见BD流式细胞仪
可检测的样本及获取的参数
其可检测的样本种类多样,包括各种细胞(如外周血、骨髓、细针穿刺、灌洗液、实体组织、悬浮或贴壁培养的细胞)、微生物、人工合成微球、血清、血浆、培养上清、细胞裂解液等;研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征,如大小、颗粒度、表面抗原、核酸、分泌蛋白及其浓度等。
简要操作流程
(以全血样本为例)
1. 获得抗凝全血;
2. 荧光染料偶联的抗体标记细胞;
3. 裂解血液样本中的红细胞;
4. 流式细胞仪检测制得的单细胞悬液;
5. 分析数据。
基本原理
流式细胞仪的液流系统能使单细胞悬液中的细胞被高压驱动的液流包裹并依次通过特定波长的激光束,细胞(直径0.2 μm ~ 150 μm)在被激光束照射时能够使激光束发生散射光,细胞上结合的荧光素被激光激发后能发射荧光。
流式细胞仪光学系统中设置了多个接收器(光电倍增管)用以接收产生的光信号,一个在激光束直线方向上接收散射光信号(前向角散射),其他在激光束垂直方向上接收散射光信号(侧向角散射)和荧光信号。接收器接收到光信号后将光信号转变为电子信号并按照一定比例关系将电子信号强度提高。
流式细胞仪电子系统对经接收器转变的电子信号进行分析,并用散点图、直方图或密度图展示其强弱高低,信号强弱的波动就能反映出每个细胞的物理化学特征。
流式细胞仪分选系统能对经过电子系统分析符合实验者要求的细胞施加相应的电流,使其从细胞液流中被分离到相应的收集管中。
应用领域
流式细胞术涉及细胞与分子生物学和生物技术、单克隆抗体技术、激光技术、荧光化学、光电子物理、流体力学、计算机技术等学科,主要应用于生命科学的基础研究,尤其是免疫学、细胞生物学和分子生物学,80年代后期开始应用于临床,辅助多种疾病的诊断。