组织活检、内窥镜取材标本的单细胞悬液制备
这类样本由于材料较少，制备起来比较麻烦。但其制备方法与实体组织基本相似。
●取材后立即放入盛少许PBS液青霉素小瓶中；
●用300目尼龙网盖住固定小烧杯，用PBS湿润，取新鲜组织标本置于尼龙网上；
（因标本量较少，尤其是内窥镜取材至少要3块以上）
●用PBS浸润的剪刀剪碎组织，无组织块存在时，用原来装标本的青霉素小瓶中的PBS液冲洗细胞匀浆并过滤到小烧杯中，尽量多的收集细胞；
●70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
石蜡包埋组织样本的制备
▲石蜡包埋组织切成40-50 μm厚的组织片3-5片，或用乳钵研成0.5 mm直径大小颗粒状，放入10 mL试管中；
▲脱蜡：加入二甲苯5-8 mL，在室温下脱蜡1-2天，视石蜡脱净与否，更换1-2次二甲苯，石蜡脱净后，弃去二甲苯；
▲水化：依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5 mL，每步为10 min，去乙醇，加入蒸馏水3-5 mL，10 min后弃之；
▲消化：加入2 mL 0.5%胰蛋白酶（pH 7.2-8.0）消化液，置37 ℃恒温水浴中消化30 min，加生理盐水终止消化；
（在消化期间，每隔10 min用振荡器震荡1次）
▲经300目尼龙网过滤，未消化好的组织可做第2次消化；
▲收集细胞悬液，1500 rpm离心沉淀，再以生理盐水漂洗1-2次，离心沉淀500-800 rpm去碎片；
▲加少许生理盐水，混匀；
▲低温保存备用。
骨髓细胞单细胞悬液制备
●无菌抽取骨髓液0.5 mL，滴入含1000 U/mL肝素的1 mL PBS中，再加入PBS稀释至10 mL；
●用吸管吸取5 mL稀释骨髓液徐徐加入盛有4 mL人类淋巴细胞分离液的离心管中；
●室温离心2000 rpm，20 min，离心后骨髓有核细胞分层在PBS-人类淋巴细胞分离液之间形成的界面上；
●吸取有核细胞层，加入到10 mL PBS中，混匀，1000 rpm离心5 min，弃上清；
●收集骨髓细胞，加入少许PBS，混匀；
●70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
培养细胞的单细胞悬液制备
一般细胞培养分为悬浮培养和贴壁培养。
1.贴壁细胞的单细胞悬液制备
▲用0.04% EDTA2Na或0.25%胰酶消化3-7 min（根据室温情况而定，至光镜下见到贴壁细胞间出现筛状间隙为止），弃去消化液，加PBS重悬细胞；
▲用吸管将细胞从瓶壁上轻轻吹打下来，并移入离心管中，800-1000 rpm离心5 min；
▲弃上清，加5-8 mL PBS，800-1000 rpm离心5 min，重复2-3次去除细胞悬液中的细胞碎片；
▲加少许PBS，将细胞沉淀轻轻吹打混匀；
▲70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
2.悬浮细胞的单细胞悬液制备
▲收集细胞培养液到离心管中，800-1000 rpm离心5 min，去上清；
▲加入适量0.04% EDTA2Na或0.25%胰酶，边消化边吹打至光镜下细胞团块少于10%，加入两倍含血清培养基终止消化；
▲经300目尼龙网过滤，800-1000 rpm离心5 min，去上清；
▲PBS清洗2-3遍后加少许PBS混匀细胞沉淀；
▲70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
脱落细胞样品单细胞悬液制备
在临床工作中，可以收集到大量自然脱落细胞，这些细胞标本经过简单处理，便可成为较好的单细胞悬液，主要包括脱落细胞、胸腹水细胞、尿液、内镜刷检细胞等。
1. 食管拉网细胞的单细胞悬液制备
●将食管拉网器上的细胞洗脱到20 mL PBS中，1500 rpm离心5 min，去上清；
●用PBS清洗两遍，500-800 rpm离心1-2 min，去上清；
●加入5 mL PBS重悬细胞，以300目尼龙网过滤，离心去上清，加少许PBS混匀细胞沉淀；
●加固定液或低温保存，备用。
2. 尿液脱落细胞的单细胞悬液制备
●用一清洁器皿收集24 h尿液，4 ℃沉淀2 h，轻轻倒去上清液，留下少许带细胞的沉淀物，用吸管移至10-20 mL离心管中，500 rpm离心10 min，去上清；
●加8-10 mL PBS重悬细胞，1000 rpm离心10 min，去上清，重复再洗一遍；
●5 mL PBS混匀细胞，300目尼龙网过滤，离心去上清，再加少许PBS，混匀细胞沉淀；
●70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
3. 胸腹水脱落细胞的单细胞悬液制备
●抽取胸、腹水50-100 mL，加入1 mL 1000 U/mL肝素液，放盐水瓶中置于4 ℃静置6-12 h，弃去上清；
●将底部10-20 mL用长吸管移入新的离心管中，用PBS清洗3遍，1500 rpm离心5min；
●5 mL PBS混匀细胞，300目尼龙网过滤，离心去上清，再加少许PBS，混匀细胞沉淀；
●70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
4.冲洗液细胞的单细胞悬液制备
●用300-500 mL生理盐水冲洗胃或膀胱，冲洗一定时间后，吸出冲洗液放入容器中于4 ℃静置6-12 h；
●将底部20-40 mL用长吸管移入新的离心管中，离心沉淀并用生理盐水清洗2遍；
●10 mL PBS混匀细胞，300目尼龙网过滤，1000 rpm离心10 min，去上清，再加少许PBS，混匀细胞沉淀；
●70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
5.宫颈脱落细胞的单细胞悬液制备
●首先用生理盐水冲洗宫颈表面的分泌物，用海绵轻拟宫颈表面，可用20 mL生理盐水洗脱吸附在海绵上的脱落细胞；
●1500 rpm离心5 min，并用生理盐水清洗2遍，弃上清；
●加少许生理盐水混匀细胞；
●70%冰乙醇固定细胞或低温保存备用。
制备样品常用BD缓冲液
另外Phosflow Perm Buffer还有II（558052）、III（558050）、IV（560746 10×）
甲醇的含量不同，级别越高含量越多，破核膜效果越强烈，但对其他膜抗原会有所破坏。
