当您用含血清体系培养出的类器官筛选药物，数据不可重复却苦于找不到原因该怎么办？

当您用含血清体系培养出的类器官基因过表达之后，阳性结果迟迟看不到，可曾想过是什么原因？

当您的paper因为培养体系中的血清干扰实验数据结果，被审稿人返稿要求返修，实验无法重复时该怎么办？

类器官培养 血清之坑

胎牛血清是细胞培养中广泛应用的添加物，含有丰富的细胞生长必需的营养成分，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。但血清作为细胞培养的好伙伴，却是类器官培养中的一大噩梦。

尽管胎牛血清已被广泛使用，但血清的确切成分仍不清楚，并可能导致类器官生长不一致。 动物来源的血清存在异质性，令人担忧的是，胎牛血清对类器官培养和表型具有显著且未知的影响。
Seino 等发现，含有胎牛血清的条件培养基无法长时间维持胰腺癌类器官生长，额外的血清加入会加速类器官的衰老，进一步影响基于类器官的实验。

含血清培养基和无血清培养基对胰腺癌类器官增殖生长的影响

总之血清的成分很复杂，包括各种促生长、分化的因子和激素等，其浓度和组成都是未知的。而类器官培养过程中需要严格控制其生长的信号通路，血清中丰富的营养因子可能在短期有促生长的作用，但其中一些未知的成分会对信号调控造成很大的干扰，甚至会影响类器官生长的命运，譬如培养多代后因细胞分化，使得类器官失去生长能力，这在有血清的体系中非常常见。

不用含血清的培养基，那我该怎么办?购买因子自配试剂可行吗？

目前类器官培养的针对于类器官优化过的因子比较稀缺，而且单价比较高，几十种试剂搭配，科研自用无标准（Nature Protocol 部分配方还有隐藏），而且人工配制批次效应，实验重复性差。建议还是选用高品质、无血清、做过类器官培养测试的类器官培养试剂盒来帮助您节约时间和金钱成本，快速推动类器官培养进程。

那使用条件培养基呢？
依据Hans Clevers实验室早期发表的文章，可以采用条件性培养基代替纯化的细胞因子进行类器官培养，但是还是有以下问题没有办法解决：

1、细胞因子含量和活性检测：含有多种蛋白质，不易检测且每批次都要重新进行检测。
2、纯度：含有大量细胞代谢产物，纯度较低，在条件培养基中包含动物来源的血清也可能导致类器官建模的非标准化。
3、储存：由于条件性培养基是液体因此不论是短期冷藏保存，还是长期冻存，都会降低细胞因子活性。
4、内毒素：通常没有去除内毒素的步骤。
5、批间一致性：不能完全控制培养条件，批间一致性较差。

总之：条件培养基的成分存在批次间差异并且包含未知的额外因素，这些因素可能对类器官表型的影响不明确，这可能会影响实验的可重复性。因此，选用高品质的商品化无血清类器官培养试剂盒能够帮您节约时间和金钱成本。

可我用含血清的培养基养的类器官也长挺好的呀？

类器官的培养终极目的不是为了养好，是为了获得标准的模型，更好的开展科学实验，血清成分复杂存在许多未知因素，有时候会干扰实验结果，掩盖培养细胞的生理功能，不容易发现一些调控变化导致类器官的研究结果不稳定甚至获得相反的结果。

肿瘤类器官能否用正常类器官的试剂盒培养？

因为目前国内外肿瘤类器官试剂盒很少，多为正常组织的试剂盒，所以有些厂家会推荐用正常类器官试剂盒培养对应肿瘤类器官，这是不符合类器官培养逻辑的，类器官培养基本质是还原对应组织在体内的微环境，不同的组织，正常组织和肿瘤组织对应的微环境显然是不一样的，特别是因为某些肿瘤的基因突变，其微环境相对正常组织甚至是截然相反的，用同一套试剂培养正常和肿瘤类器官显然是不可取的。

那我该用什么培养基？

无血清类器官试剂盒 您的最佳选择

1. 全工程化、稳株生产因子替代血清
2.更稳定效期长达1年
3.不同组织、不同癌种、不同亚型专属培养基

基础扎实：自主生产的培养因子，均做过工程优化，稳株生产，品质可靠。
体系优异：，成功率高（总体80%以上，个别95%以上），扩增，传代稳定。
品质精良：每批产品都严格经过类器官培养测试，批次之间无差别，超高生物活性。
功能强大：细胞起始量要求低，高建成率（可以适用于：手术，活检，镜检，恶性积液样本。）
操作简单：A、B、C三个组分混合，免去繁杂配液过程。

类器官试剂盒注意事项

1. 收到产品，请及时确认试剂盒A液是否2~8°C运输，B、C液是否干冰运输。

2. 产品分装：建议按配置10mL或者20mL完全培养基进行分装。
A液2~8°C保存无需分装，在冰上解冻B、C并充分混匀。按照配置完全培养基（10mL或20mL）所需的量分装B、C，分装后保存在-20°C，从而避免反复冻融。

3. 完全培养基配置（10ml为例）：
    按A：B：C（：D）=1：50：250比例配置。
    例：
    A：B：C（：D）=9.76mL：20

4. 完全培养基保存：完全培养基配置后请立即使用，保存在2~8°C，两周之内用完。