卫星RNA由于其缺乏编码复制酶和衣壳蛋白的能力，不能独立复制，因此不能独立存在，需要借助辅助病毒编码的复制酶完成复制，并在寄主蛋白帮助下完成生命循环，属于一类特殊的生物。目前，植物或动物病毒的卫星RNA已有大量研究，显示其一般与辅助病毒没有或仅有很短的同源序列，而且包被在由病毒外壳蛋白构成的病毒粒体里面，然而有关真菌病毒的卫星RNA研究较少。本研究针对一种真菌弱毒病毒卫星RNA开展研究，发现了一类特殊的卫星RNA，分析了其对寄主病毒的影响和生物学特性。

研究人员首先提取了携毒菌株AH1-1中的双链RNA，通过S1核酸酶和DNA酶Ⅰ的消化，共发现三条双链RNA，根据片段长度，自大到小命名为dsRNA1~dsRNA3，无毒对照菌株TP-2-2W进行相同处理，未发现这三条双链RNA（图1B）。进一步的RNA酶A消化显示，在低盐浓度下，这三条双链RNA均被消化，进一步说明了这些片段是双链RNA（图1D）。

图1 真菌的形态，核酸提取及酶消化

为了进一步研究该病毒的分类地位和基因组结构，研究人员对三条双链RNA进行全长基因组克隆发现，dsRNA1全长10316个碱基对，5′-非编码区有512个碱基对，3′-非编码区有714个碱基对，并在3′-末端有6个腺嘌呤组成的多聚腺苷酸尾巴（poly(A) tail），第513至9602位核苷酸编码一个开放阅读框（ORF），共编码3029个氨基酸（图2B）。根据该ORF构建系统发育树发现该病毒与弱毒病毒科（Hypoviridae）甲型弱毒病毒属（Alphahypovirus）中的多种病毒聚为一支（图2A），故将该病毒命名为无花果拟盘多毛孢弱毒病毒1（Pestalotiopsis fici hypovirus 1，PfHV1）。根据该病毒科共有特性推测，PfHV1基因组由单链RNA组成，双链RNA为其复制中间体。

图2 PfHV1的系统发育分析和基因组结构

DsRNA2是dsRNA1的缺陷型RNA，其共有5段序列与dsRNA1完全一致（分别位于第4至3939，5988至6225，6220至6508，6512至6770，6774至7562位碱基），dsRNA3是该病毒的类似卫星RNA（Satellite Like-RNA，SatL-RNA），dsRNA3的第1至170位碱基与dsRNA1完全一致（图3A），且二者能够通过蔗糖梯度密度离心共沉淀，在15%蔗糖层有明显富集（图3D）。这与传统的卫星RNA不具有或仅有少部分序列与辅助病毒同源有很大差异，且与整体病毒科和双生病毒科相比，其不被衣壳蛋白包被。在弱毒病毒科中，已有两例报道的卫星RNA，分别是板栗疫病菌弱毒病毒3（Cryphonectria hypovirus 3，CHV3）的dsRNA3和dsRNA4，核盘菌弱毒病毒1（Sclerotinia sclerotiorum hypovirus 1，SsHV1）的S-dsRNA，其均已被验证能够编码成熟的蛋白质，而根据SatL-RNA的ORF预测结果推测，其不能够编码成熟的蛋白质。

为了探究SatL-RNA对辅助病毒复制的影响，在携毒菌株中超表达SatL-RNA，发现与野生型菌株相比，超表达菌株中辅助病毒的丰度显著降低（图3E），说明SatL-RNA在寄主中的复制干扰辅助病毒的复制，这可能与二者竞争复制酶和寄主复制资源有关。

图3 缺陷型RNA和SatL-RNA的鉴定和分析

进一步研究发现，PfHV1对寄主形态、生长速度和致病力无显著影响（图4A~C），与多个无毒菌株相比，携毒菌株AH1-1仍具有较强的致病能力（图4E），说明PfHV1不能发挥弱毒作用。

图4 PfHV1侵染对真菌生长速度和致病力的影响