肿瘤微环境内的免疫细胞在肿瘤的发展和治疗中都起着关键作用，已知这些肿瘤浸润性免疫细胞可能具有拮抗或促进肿瘤的功能，其中，B细胞通过生发中心反应在肿瘤免疫中起关键作用，尤其是聚集形成三级淋巴结构 (Tertiary lymphoid structure，TLS)时。研究表明，在大多数实体瘤中，TLS的存在与良好的免疫治疗反应和临床预后密切相关，这引起了人们的极大关注。

单细胞测序技术，这一场革命彻底改变了我们对肿瘤的认识，对肿瘤的细胞组成拥有了更广泛的见解，但通过单细胞视角，基于TLS的表达情况，去探索肿瘤微环境，这种极具创新的见解还未有人报道。

乳腺癌是一种异质性很强的疾病，虽然，近年来免疫治疗提高了患者在各种实体或血液系统恶性肿瘤中的存活率，但大多数乳腺癌亚型对免疫检查点阻断治疗几乎没有反应。B细胞在抗肿瘤免疫中起重要作用，特别是在TLS中聚集时。然而，单细胞分辨率下的B细胞异质性和三级淋巴结构在乳腺癌中的临床意义有待进一步探索。

对8774个TIL-B进行亚分类和功能富集，可分为5个簇：CXCR4+ B 细胞（B0）、生发中心B细胞（B1）、滤泡B细胞（B2）、浆细胞（B3）和幼稚B细胞（B4）。作者意外地发现浆细胞中免疫球蛋白重链和轻链基因存在互斥表达。浆细胞和类别转换B细胞有相同的表现：重链基因IGHG、IGHA和轻链基因IGLC、IGKC存在相互排斥的差异表达。这表明在乳腺癌中存在潜在TLS并发生局部持续类别转换重组。

接下来，该研究开始探讨TIL-B与TLS的关系，为了验证上述推测，作者使用来自TCGA乳腺癌队列的H&E染色组织切片进行分析，以评估TLS的存在情况，CD23最近被报道是滤泡树突状细胞（Follicular dendritic cell，FDC）的标志物，并且FDC上CD23的表达不依赖于肿瘤的CD23过表达。该研究通过IF发现CD23与FDC标记物CD21共定位，此外，还有研究报道CD23也表达于成熟TLS中，基于此，作者大胆推测，CD23或许是BC中成熟TLS的潜在生物标志物，并对其进行了验证。通过对随机抽取的70例BC患者进行H&E和CD23的IHC染色，研究发现，通过H&E染色筛查到的每张切片中的成熟TLS数量明显低于通过CD23 IHC染色筛查到的成熟TLS数量（1.3 : 2.1），并且这两种方法之间的一致性适中（组内系数 0.75，95%CI 0.63-0.84；kappa 0.75，SE 0.089）。

TIL-B与成熟三级淋巴结构(TLS)的相关性分析。

评估已进行过单细胞测序的14名患者的TLS情况，由于现实因素，经评估后，将3名BC患者纳入TLS阳性组，其余6名为TLS阴性组。接着，作者进行了两组中的成纤维细胞和免疫细胞间的CellphonDB和Cellchat分析比较，发现TLS阴性患者存在潜在的免疫性抑制微环境。