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发布日期:2024/2/1 16:20:00

在样本制备的过程中,往往会应用一些试剂(如多聚甲醛、福尔马林等)对新鲜组织进行处理,这个过程可能导致抗原位点被封闭,为了避免影响后续免疫染色的效果,我们需要先对切片进行抗原修复。对于石蜡切片来说,抗原修复是不可或缺的步骤,常用的方法有酶消化法热修复法

1、酶消化法

作为最早的抗原修复方法,常用的消化酶有三个:胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K。但酶的作用极易受温度影响,如果消化不足,则无法充分暴露出抗原位点,过度的消化又会破坏组织结构,影响最后阳性信号的判读,因此在后续的发展中,酶消化法渐渐被热修复技术所替代,但对于个别抗原,如免疫球蛋白、补体,以及在甲醛固定、石蜡包埋的肾活检中,酶消化法依旧不可替代。

2、热修复法

抗原热修复是采用高温、高压方法配合合适的抗原修复液,使得被固定液封闭的抗原位点重新暴露,提高抗体的阳性检出率。
 
最常用的抗原修复液有两种:柠檬酸钠缓冲液(pH=6)、EDTA缓冲液(pH=8或9),一般来说一抗的说明书都会写明需要选择哪种修复液。如果说明书没有推荐,柠檬酸钠缓冲液能够适配大部分的抗体,EDTA缓冲液相对修复效果更强,但阳性增强的同时也会提高非特异背景,一些比较难表达的抗体可以选择EDTA缓冲液。


 
常见热修复方法对比

 

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