激酶（kinase）是一类生物化学里的分子，从高能供体分子（如ATP）转移磷酸基团到特定靶分子（底物）的酶，这一过程谓之磷酸化。
图1：激酶作用原理
蛋白激酶是最大的激酶族群。作用于特定的蛋白质，并改变其活性。这些激酶在细胞的信号传导及其复杂的生命活动中起到了广泛的作用。
01
依赖激酶活性的激酶抑制剂筛选
1.1
丝苏氨酸激酶（STK）和酪氨酸激酶（TK）
HTRF KinEAST TK和KinEAST STK试剂盒适用于所有酪氨酸激酶的检测，试剂盒提供生物素标记的底物、Eu标记的磷酸化位点特异性抗体、XL665标记的亲和素以及缓冲液。激酶将底物磷酸化，Eu-Ab识别磷酸化底物，XL665-SA与底物上的生物素结合。Eu与XL665接近，产生HTRF信号。
技术优势
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背景低，化合物和培养基的干扰小。
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均相检测，不需要洗板（操作简单），1h出检测结果。
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实验稳定，对酸性溶液，Mg²+，Mn2+，DMSO，EDTA比较耐受，并且读数稳定，24小时以上，甚至可达7天。
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应用灵活多样。
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易于实现微型化。
图2：HTRF KinEAST TK/STK工作原理及流程
HTRF KinEASE TK是通用型酪氨酸激酶活性试剂盒，HTRF KinEASE STK，有三条底物可供选择HTRF KinEASE STK S1，S2，S3，根据激酶靶点选择其作用底物即可。现已超过200个激酶得到验证，可直接提供数据参考。验证数据使用的激酶来自Carna激酶。
02
非活性的激酶的抑制剂筛选
最著名的激酶抑制剂，格列卫（伊马替尼），结合了一种非激活形式的Abl。因此，这种抑制剂更难使用基于活性的检测。此时，结合试剂盒很好地解决这样的难题，观察生化水平的阻断结果，即可获得功能评估。这个方法同样适用于靶蛋白是激酶的PROTAC小分子的研究。
图9：激酶结合试剂盒原理
03
根据检测ATP消耗，筛选激酶抑制剂
在激酶检测反应之后监测ATP消耗。easylite-Kinase™是一种检测试剂，试剂盒中的萤光素和萤光素酶与激酶反应后剩余ATP反应从而发光，该发光强度与ATP的剩余量成正比。2小时信号稳定，方法简单，通用性极强，酶标仪化学发光模块即可轻松检测。
图10：easylite-Kinase™工作原理及稳定性
来源于优宁维药物研发官网
