HTRF®（TR-FRET）和AlphaLISA®两个知名均相检测技术，那么，在血清样本中的表现，究竟谁更胜一筹？
本文通过检测IL-1β，IL-6，insulin，Aβ-40，TNFα五种生物标志物性能，开展实验...
技术原理图如下：AlphaLISA®（左），HTRF®（TR-FRET）（右）
灵敏度和动态范围比较
通过用含血清的样品基质制备标准品的稀释，测定每种检测方法的动态范围和检测下限(LDL)。将获得的信号与每种试验方法所测试的标准浓度相对应。LDL是通过计算背景平均值+3 x S.D从校准曲线中确定的。每个分析物的校准曲线和LDL值如图所示。
AlphaLISA检测方法对5种分析物中的4种比TR-FRET检测方法高几倍(IL-1β：100倍，IL-6：50倍，胰岛素：30倍，TNFα：4倍)。AlphaLISA Aβ-40检测的LDL略高于相应的TR-FRET检测。在这些含血清的样本中，AlphaLISA检测显示出更广泛的动态范围。
精准性比较
对每种分析物的回收率进行评估，并作为测定准确性的指标。将三种已知浓度的标准品加入各自的测定缓冲液中，每个浓度重复三次。三种浓度均在标准曲线范围内。回收率的计算方法是将测量浓度除以理论浓度，再乘以100。
AlphaLISA和TR-FRET Aβ40检测方法对所有分析物的回收率大致相同。
*Nd = not determined
重复性比较
在低、中和高浓度下，AlphaLISA检测的变异性低于相应的TR-FRET检测，在线性范围内的变异系数(%CV)值非常低。而AlphaLISA TNFα和IL-6检测的检测间重复性与相应的TR-FRET检测相当。
低胰岛素浓度血清对测定性能的影响
在本研究中，样本中的血清对AlphaLISA性能的影响最小。相比之下，在存在血清的低胰岛素浓度下，TR-FRET胰岛素检测信号受到一定的干扰。
结论
对几种不同分析物的AlphaLISA和TR-FRET分析方法进行了评估。总的来说，与TR-FRET检测相比，AlphaLISA检测显示出更好的敏感性、更广泛的动态范围和更少的的变异性。数据表明，AlphaLISA检测非常适合于复杂的样本基质，如含有胎牛血清的血清和细胞培养基。特别是，在耗尽的血清中进行的胰岛素AlphaLISA检测证明在低分析物浓度下具有优越的线性。
以上分析仅为血清样本提供参考。但是，TR-FRET凭借其试剂稳定性好，复现性好，可反复读板，信号稳定性好，简单易操作等优势，受到各领域研究人员的广泛认可，如：药物研发，mRNA疫苗研究，细胞治疗和基因治疗等。
简而言之，根据实验需求，如：样本特征、灵敏度、线性范围、通量等，选择最适合的技术。
来源于优宁维药物研发官网
