克服初始 T 细胞在扩增过程中过度刺激和过度分化的问题。如果发生这种情况，当细胞被开发成终产品时，其中很大一部分细胞将耗竭，从而降低整体治疗效果。为避免这种情况，使用的培养基需要驱使细胞向早期记忆细胞——如中央记忆 T 细胞（TCM) 和干细胞记忆 T 细胞（TSCM)分化，并且将细胞表型维持在这一阶段，避免进一步的分化和耗竭。

Gibco™ CTS™ OpTmizer™ Pro SFM 在同种异体 T 细胞治疗产品制备过程中，专门用于促进人 T 淋巴细胞的扩增。

首先从外周血单核细胞 (PBMC) 中阴性分离⼈原代T细胞。然后将这些细胞以 1 x 10⁶ 个细胞/mL的密度接种到含有指定培养基的培养⽫中，并在 100 IU/mL rIL-2 的存在下以每个T 细胞3个磁珠的比例用Gibco™ Dynabeads™ Human T-Expander CD3/ CD28  磁珠激活T细胞。在使用Gibco™ CTS™OpTmizer™ Pro SFM 的所有实验中，根据用户手册，通过添加Gibco™ L-谷氨酰胺至终浓度为 2mM 以制备完整培养基。

在整个实验过程中，使用细胞活力分析仪每 2-3天对 T 细胞进行计数。活细胞密度保持在 0.25×10⁶ 细胞/mL，rIL-2 浓度为100 IU/mL。

来自6名健康供体的T细胞如上所述在18天的扩增工作流程中使用Gibco™ CTS™ OpTmizer™ Pro SFM 进行培养。归一化处理后，到第 10 天，所有供体细胞扩增平均增加了约 20%，到第17天进一步上升到 100% 以上（图 2）。每个供体的归一化结果由灰线表示。此外，所有供体都显示出稳健的扩增，并且没有观察到培养基对细胞增殖的负面影响。

通过评估中央记忆细胞表面标志物 CD62L、CCR7 和 CD27 的表达以测定源于相同6名健康供体的细胞中T细胞表型，用流式细胞仪进行分析。归一化处理后，培养第5天和第10天，在Gibco™ CTS™OpTmizer™ Pro SFM 中生长的健康供体细胞中央记忆 T 细胞亚群占比增加了 10-20% (图3)。当在Gibco™ CTS™ OpTmizer™ Pro SFM 中扩增时，所有供体细胞在第 5 天和第 10 天时都显示出早期记忆T细胞亚群比例的增加（数据未显示）。

为了确定Gibco™ CTS™ OpTmizer™ Pro SFM促使T细胞产生稳健免疫反应的能力，评估了T细胞产生的干扰素 γ (IFNγ)水平。IFNγ 水平是一个特别关键的测量参数，因为该细胞因子可以刺激先天性和适应性免疫反应，并有可能通过进一步刺激巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞并增强宿主细胞因子释放来提高整体的治疗效果。

为了测量该参数，将在Gibco™ CTS™ OpTmizer™ Pro SFM 中扩增的T细胞以0.5×10⁶ 个细胞/mL的密度重新接种到指定培养基中，并在100 IU/ mL rIL-2的存在下，⽤ Dynabeads Human T-Expander CD3/CD28 以每个 T 细胞 1 个磁珠的⽐例重新刺激。在重新刺激后的第 3 天，分析培养上清中 IFNγ 的产量。归一化处理后，培养到第16天，在 Gibco™ CTS™ OpTmizer™ Pro SFM 中培养的健康供体T细胞IFNγ 的产量平均增加了 187%。（图 4）。值得注意的是，这⼀结果与 CD8/CD4 比率的变化无关，Gibco™ CTS™ OpTmizer™ Pro SFM 不影响 T 细胞的 CD8/CD4 分型。

Gibco CTS OpTmizer Pro是一种新型无血清培养基 (SFM)，用于同种异体细胞治疗中使用的人T淋巴细胞（如CD4+、CD8+、多克隆或抗原特异性）的生长和扩增。这种培养基通过改变细胞的代谢来改善中央记忆表型和细胞生长。结果是在更短的时间内生成更大的中央记忆细胞群。使用OpTmizer Pro降低了对血清的需求，可提高产品的一致性，减少成本，降低供应和污染风险，并可解决监管问题。

优势：

• 保持中央记忆 T 细胞进一步扩增，非常适合较长的工作流程（>15 天）

• 与 CTS OpTmizer 培养基相比，可提供 >90%（平均）的 T 细胞倍数扩增（来自健康供体）

• 扩增方案早期中央记忆细胞的适度增加可提高收获时的细胞得率

• 有助于在较短持续时间内获得更多相同数量的细胞

• 非常适合同种异体治疗生产