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发布日期:2023/8/2 14:24:00

Thermo Fisher Scientific Gibco™ CTS™ DynaCellect™ 磁性分离系统和专用耗材用于使用磁珠(如 Gibco™ CTS™ Dynabeads™ CD3/CD28)进行自动化 T 细胞分选和活化。该自动化仪器利用集成化的磁体,摇床和流体面板,在封闭式系统中进行细胞分离和磁珠去除操作。

 

  • 将新鲜或冻存单采血解冻,使用 Gibco™ CTS ™ Rotea™ 逆流离心系统对细胞进行洗涤和浓缩。使用 CTS Dynabeads CD3/CD28 和 CTS DynaCellect 磁性分离系统和 CTS DynaCellect 细胞分选耗材,一步对 CD3+CD28+ T 细胞进行分离和活化。

  • 使用 CTS DynaCellect 磁珠去除耗材进行磁珠去除实验。

  • 通过流式细胞仪分析样本。

 

结果

应用案例一

 

1. 分离得到的细胞纯度高,超过 95% 的目的细胞

图1 起始样品(A)和分离后的富集目的细胞样品(B)的细胞表型。通过流式细胞术确定细胞表型。

 

2.分离效率最佳,对细胞活率无影响

图2 目的细胞的分离效率(A)及起始样品和富集目的细胞的活率(B)。通过流式细胞分析和细胞计数确定分离效率。通过流式细胞术评估细胞活率。

 

3.磁珠去除工艺可实现高的细胞回收率和细胞活率,且样品残留磁珠极少。

图3 起始样品和磁珠去除后样品的细胞活率(A)。磁珠去除后的平均回收率为 85%(B)。残留磁珠很少,在 100 个磁珠/ 3百万个细胞的标准范围内。在磁珠去除前后,通过流式细胞术评估细胞活率。在磁珠去除前后,通过细胞计数评估回收率。在裂解细胞并去除细胞碎片后,在显微镜下对残留磁珠进行计数。

 

4. 磁珠去除工艺具有很高的可扩展性

图4 在磁珠去除工艺前后,10L 大规模的样品细胞活率不变(A),回收率为 100%(B),对 10L 细胞样品进行磁珠去除操作测量结果 (C)。对 10L 细胞样品进行磁珠去除操作,按照图 3 所示的相同程序计算磁珠残留。

 

5. 自动化方法可快速、有效地去除磁珠

图5 磁珠去除工艺时间线。在 60 分钟内,系统可做去磁珠处理 3L(标准流速)-9L(最大流速)的细胞样品。

 

应用案例二

1. CTS DynaCellect 能够从具有挑战性的样本中分离高纯度目的细胞

图6 起始样品(A)和分离后的富集目的细胞样品(B)的细胞表型。尽管起始样品 CD 14+ 表型比率很高,客户 A 实现了 93% 的目的细胞纯度,同时将分离效率保持在 87%(数据未显示)。通过流式细胞术检测细胞表型。

 

2. CTS DynaCellect 大大减少了磁珠残留和工艺时间

图7 客户 B 使用 CTS DynaCellect 与现有工艺比较。CTS DynaCellect 在磁珠残留(A)、工艺时间(B)和分离效率(C)方面优于现有工艺,同时保持高于客户标准的良好细胞活率(D)。

 

Gibco™ CTS™ DynaCellect™ 磁性分离系统是全自动的、可放大的、封闭式的操作系统。使用 DynaCellect 细胞分选耗材和 CTS Dynabeads CD3/CD28 磁珠进行T细胞分选激活环节,CD3+CD28+ 细胞的分离效率 >90%,纯度 >95%,与初始细胞相比,自动化分选方案对分选的T 细胞群的存活率无影响。此外,使用 Gibco™ CTS™ DynaCellect™ 磁珠去除耗材进行自动化磁珠去除时,目的细胞回收率 >85%,而且不影响细胞活率。

 

系统具有较高的可放大性,细胞分选可以做到 1L 的分选体积,最高可分选 100 亿个目的细胞,细胞处理时间短,约为 100 分钟。同样,在 50 mL/min 的流速下实现磁珠的去除,可快速处理较大体积。因此,通过易于使用且具有自动化和可放大性的 CTS DynaCellect 用于 T 细胞分选和活化以及后续磁珠去除,CTS DynaCellect 磁性分离系统可实现高纯度、高细胞活率的细胞分选过程,可改进细胞疗法生产工艺。

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